多肽修饰(磷酸化合成肽的修饰技术)固相合成磷酸化肽有两种方法:
(1)预制磷酸化的构件，然后将其组装在肽链载体上(构件法)；
(2)肽链载体的全局磷酸化。
在磷酸化Tyr、Thr和Ser的初始制备中，使用磷酸的二甲基酯、苄基酯和叔丁基酯的形式参与这三种AA的酰化。
磷酸化合成肽的修饰——特化肽生物学
为了避免液相预制的麻烦，含有Ser、Thr或Tyr的肽树脂可以在与上述类似的条件下直接酰化:
磷酸化合成肽的修饰——特化肽生物学
或者不含烷基酯的Fmoc-Tyr[PO3H2深圳生活网]-OH可以作为构建基块在肽树脂上缩合。该方法可用于制备短链磷酸肽。对于长肽，缩合产率将受到影响。特别是，当肽链上两个磷酸邻苯二甲酸酯残基彼此相邻时，会发生脱水并产生焦磷酸基副产物。此外，当磷酸化残基为Ser时，由于-Ser [PO3H2]-I的空间位阻小，当Fmoc上的氨基被去除时，它会在Ser上被消除，并产生脱氢丙氨酸残基(Dha)，同时磷酰基也会被去除。为了避免以上烦恼。很多实验室认为单苄酯的成分Fmoc-AA-[PO( OBzl) OH]-OH是最理想的。最近的研究发现单苄基酯被磷酸化
组分和固体氨基组分结合的最佳条件如下:
Fmoc-AA-[PO( OBzl) OH]-OH/HBTU(或tbtu)/hobt/diea (1: 1: 1: 2)磷酰基结构中的单苄基酯在与王树脂相同的条件下，即95%的TFA/H2O/1~2h发生裂解。
有研究表明，肽链组装在载体上后的固相磷酸化似乎更实用，因为它可以将Boc和Fmoc整合在同一个合成中，并且产物中可以有磷酸化残基和游离侧链Ser和Thr两种形式(图1)，为构效关系的研究提供了丰富的样品资源。
磷酸化合成肽的修饰——特化肽生物学
(图1)肽链组装和磷酸化后固相磷酸肽的合成
在(图1)的合成中，具有羟基侧链的三个残基，Tyr8、Thr6和Ser4被相继组装。根据设计要求。Ser6为磷酸化位点，深圳生命网的Thr4和Tyr8保护侧链自由基。因此，Ser4与其他两个残基不同，从一开始就没有任何侧链保护。